Mycobacterium terrae, штамм DSM 43227 ATCC 15755, УИКб-01-«Альфа»

  • Бактерии
  • Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского, Москва
  • 2015 г.
Посмотреть документ

Научный отчет
по результатам проведения научных исследований по изучению эффективности импульсного УФ излучения сплошного спектра в отношении Mycobacterium terraе 

Цель исследований: Определение активности импульсного ультрафиолетового излучения сплошного спектра, генерируемого УИКб-01-«Альфа», в отношении тестового штамма микобактерии терра.

2. Задачи НИР:

  1. Определение эффективности импульсного ультрафиолетового излучения сплошного спектра, генерируемого УИКб-01-«Альфа», в отношении микобактерий терра (тестовый штамм), нанесённых на вертикально ориентированные пластиковые тест-поверхности, расположенные на расстоянии 2 и 4 метра от источника облучения при различном времени воздействия.

  2. Разработка практических рекомендаций по обеззараживанию поверхностей в ЛПО туберкулезного профиля при помощи УИКб-01-«Альфа»

Работы выполнены в соответствии с договором № 62 от 10.02.2015 г.

Место и время проведения испытаний: ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора.

Материалы и методы

Оборудование: Установка импульсная ксеноновая УФ-бактерицидная для экстренной дезинфекции воздуха помещений 1 и 2 категории при отсутствии людей УИКб-01-«Альфа» производство ООО «НПП «Мелитта», Россия (Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/06906 от 26.02.2010 г.; Сертификат соответствия ГОСТ Р № РОСС RU.ИМ04.H08492 по 25.09.2016 г.).

Время воздействия - от.

Тест-поверхности: стерильные пластиковые чашки Петри

Характеристика объекта исследования: Mycobacterium terraе штамм

DSM 43227 ATCC 15755, выпуск 06.2011г. в виде суспензии, приготовленной по оптическому стандарту (109 КОЕ/мл). Тест микобактерии приобретены в Немецком музее микроорганизмов и клеточных культур в октябре 2011г.

Методика исследования эффективности обеззараживания поверхностей:

Cуточную взвесь культуры Mycobacterium terraе готовили по отраслевым стандартным образцам мутности 1х109 на физиологическом растворе. Проводили контроль жизнеспособности культуры (не мене 3-х повторностей). Для получения взвеси 1х107 проводили два серийных разведения с контролем жизнеспособности культуры в 3-х повторностях.

Для выращивания Mycobacterium terraе использовали среду Левенштейна-Йенсена.

При помощи микропипетки наносили 100 мкл микробной смеси на дно стерильной чашки Петри, растирали шпателем и подсушивали. Проводили облучение, затем добавляли 9,9 мл стерильного физиологического раствора, перемешивали круговыми движениями и делали 3 серийных разведения. Из каждого разведения делали по три высева на косяки со средой Левенштейна-Йенсена. Через 21 день инкубации при 37оС проводили подсчет выживших клеток (опыт).

Контроль проводили аналогично опыту, но без облучения. В чашке к 100 мкл микробной смеси добавляли 9,9мл физиологического раствора, размешивали круговыми движениями и делали серийные разведения с последующим высевом на плотные питательные среды для подсчета колоний.

Эффективность обработки устанавливали по формуле: (среднее количество колоний на контрольных чашках — среднее количество колоний на опытных чашках): среднее количество колоний на контрольных чашках 100.

Исследования проводили в трёх повторностях для каждого временного режима и расстояния от источника облучения до тест-поверхности.

Облучение вертикально расположенных тест-поверхностей, контаминированных Mycobacterium terraе, проводили при следующих параметрах:

  1. расстояние 2 метра от лампы установки. Время облучения 1, 2, 5, 10 мин.; 2,4, 8,16 минут.

  2. расстояние 4 метра от лампы установки. Время облучения 4, 8, 20 минут; 8, 16, 30минут.

Проведено 2 серии экспериментов.

Результаты исследований:

В первой серии экспериментов исследования проводилась с использованием микробной взвеси с плотностью   1х109КОЕ/мл и 1х107КОЕ/мл при расстоянии облучателя до контаминированных тест-поверхностей 2 метра. Результаты представлены в таблице№1

Таблица 1. Эффективность воздействия импульсного УФ излучения сплошного спектра, генерируемого УИКб-01-«Альфа», на микробную взвесь микобактерий терра с плотностью 109 КОЕ/мл и 107 КОЕ/мл, нанесенную на вертикально ориентированные пластиковые тест поверхности, расположенные на расстоянии 2 метра от излучателя при различном времени.

Плотность микробной взвеси 109КОЕ/мл

Разведение

Кол-во посевного материала
(КОЕ/мл)

Плотность контаминации (КОЕ/мл)
контроль

Количество выживших клеток (КОЕ) после облучения при времени, опыт

2 минуты

4 минуты

8 минут

16 минут

10-3

1 000 000

ср. 1,1 х106

>300

>300

ср.91,7

 

0

10-4

 

100 000

ср. 1,0х105

>300

ср. 51

ср.7,3

0

10-5

 

10 000

ср. 1,1х104

ср.90

ср.5,3

ср.1

0

Эффективность,%

99,2

99,95

99,99

100

плотность  микробной взвеси 107КОЕ/мл

Разведение

 

Кол-во посевного материала

(КОЕ/мл)

Плотность контаминации (КОЕ/мл)

контроль

Количество выживших клеток (КОЕ) после облучения при времени, опыт

2 минуты

4 минуты

8 минут

16 минут

10-3

10000

ср.1,0х104

ср.110

ср.4,3

ср.1,0

0

10-4

1000

ср. 0,9х103

ср.0,3

0

0

0

10-5

100

ср.110

0

0

0

0

Эффектив-ность,%

98,9

99,96

99,99

100

Из данных, представленных в таблице №1, следует, что при 99,99% эффективность импульсного УФ излучения сплошного спектра в отношении микобактерий терра, нанесенных на вертикально ориентированные пластиковые тест поверхности, расположенные на расстоянии 2 метров от излучателя, достигается за 8 минут, 100% эффективность - за 16 минут.

Уровень инициальной контаминации тест-поверхностей (109 КОЕ/мл и 107 КОЕ/мл) не оказал влияния на результаты исследования.

Вторая серия экспериментов проводилась с использованием микробной взвеси с исходной плотностью 1х107КОЕ/мл при расстоянии облучателя до контаминированных микобактериями тест-поверхностей 4 метра. Результаты представлены в таблице№4

Таблица 4. Эффективность воздействия импульсного УФ излучения сплошного спектра, генерируемого УИКб-01-«Альфа», на микробную взвесь микобактерий терра с плотностью 107 КОЕ/мл, нанесенную на вертикально ориентированные пластиковые тест поверхности, расположенные на расстоянии 4 метра от  излучателя при различном времени.

Разведение

Кол-во посевного материала
(КОЕ/мл)

Плотность контаминации (КОЕ/мл)
контроль

Количество выживших клеток (КОЕ) после облучения при времени, опыт

8мин

16мин

30 мин

10-3

10000

Ср.1,06х104

Ср.9,3

Ср.1,7

0

10-4

1000

Ср.1,13х103

Ср.1,7

Ср.0,3

0

10-5

100

Ср.113

0

0

0

Эффектив-ность, %

99,8

99,97

100

Результаты, полученные во второй серии экспериментов свидетельствуют о том, что увеличение расстояния от источника излучения до контаминированных тест-поверхностей приводит к снижению эффективности импульсного УФ излучения сплошного спектра. При расстоянии 4 метра от источника излучения до контаминированных микобактериями тест-поверхностей 99,97% эффективность была достигнута за 16 минут воздействия, а 100%-за 30 минут.

Полученные в обоих сериях экспериментов уровни бактерицидной эффективности обеззараживания контаминированных микобактериями терра тест-поверхностей с помощью УИКб-01-«Альфа» находятся на уровне или превышают критерий эффективности, принятый для дезинфицирующих средств, применяемых в режиме дезинфекции поверхностей помещений и объектов больничной среды (99,99%)(Руководство Р 4.2.2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», М. 2011 г.).

Выводы:

  1. Импульсное УФ излучение сплошного спектра, генерируемое УИКб-01-«Альфа», обладает высокой микобактерицидной активностью:

    • 99,99% эффективность достигается за 8 минут, 100% - за 16 минут при расстоянии от облучателя до вертикально ориентированных тест-поеврхностей 2 метра,
    • 100% эффективность достигается за 30 минут при расстоянии от облучателя до вертикально ориентированных тест-поеврхностей 4 метра.
  2. Микобактерицидная активность УИКб-01-«Альфа» не зависит от плотности микробной контаминации тест-поверхностей.

Практические рекомендации для медицинских организаций.

  1. Включать УИКб-01-«Альфа» в комплекс дезинфекционных мероприятий (очаговая дезинфекция поверхностей и воздуха помещений) медицинских организаций туберкулезного профиля. Основание - высокая микобактерицидная эффективность (не менее 99,99%).

  2. Использовать УИКб-01-«Альфа» в отделениях пульмонологии и рентгенологии, в которых отмечается высокий риск   заноса и распространения возбудителей туберкулёза для проведения очаговой дезинфекции поверхностей и воздуха помещений.