Staphylococcus aureus, штамм 907, «Альфа-06»

  • Бактерии
  • Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского, Москва
  • 2018 г.
Посмотреть документ

НАУЧНЫЙ ОТЧЕТ
по результатам изучения эффективности обеззараживания поверхностей, контаминированных тестовым и клиническим штаммами золотистого стафилококка, с применением Установки импульсной ультрафиолетовой передвижной для обеззараживания воздуха и поверхностей помещений «Альфа-06»

Цель испытаний: изучение активности импульсного ультрафиолетового излучения сплошного спектра, генерируемого импульсной установкой «Альфа-06», в отношении тестового и клинического штаммов золотистого стафилококка.

Задача НИР:

  1. Обоснование режимов обеззараживания открытых поверхностей, контаминированных тестовым и клиническим штаммами S.aureus, импульсным ультрафиолетовым излучением сплошного спектра, генерируемым установкой «Альфа-06».

  2. Определение влияния органических загрязнений на эффективность обеззараживания поверхностей, контаминированных клиническим и тестовым штаммами S.aureus, импульсным ультрафиолетовым излучением сплошного спектра, генерируемым импульсной установкой «Альфа-06».

Работы выполнены в соответствии с договором № 85 от 20.04.2018г. и №114 от 18.06.2018 г.

Место и время проведения испытаний: ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, сентябрь-декабрь 2018 года.

Материалы и методы

Оборудование:

  • Опытный образец Установки импульсной ультрафиолетовой передвижной для обеззараживания воздуха и поверхностей помещений «Альфа-06» (далее установка «Альфа-06»).

Тест-поверхности: стерильные пластиковые чашки Петри одноразового использования.

Питательные среды: агаризованная питательная среда ЖСА.

Характеристика штамма: МRSA шт.02840 - устойчив к бета-лактамным антибиотикам, бензилпенициллину и полусинтетическим пенициллинам (к 7 из 16 тестируемых антибиотиков).

Тестовый штамм Staphylococcus aureus шт. 906, используемый для тестирования эффективности средств химической дезинфекции.

В качестве органического загрязнителя использовали Сыворотку лошадиную нормальную для бактериологических питательных сред жидкую (производитель НПО Микроген ФГУП, Россия) раствор для микробиологических целей: 100 мл, фл., с.40, выпущена 03.2018 г., срок годности -04.2019, Рег. № ЛС-002083.

Исследования эффективности импульсного ультрафиолетового излучения сплошного спектра, генерируемого установкой «Альфа-06», проводили в соответствии с представленной ниже схемой эксперимента:

  1. подготавливали вертикальную поверхность для крепления на них чашек Петри;

  2. чашки Петри крепили на одной высоте с лампой установки «Альфа-06»;

  3. установку располагали на расстоянии 2 м к подготовленной вертикальной поверхности;

  4. включали установку в сеть;

  5. в соответствии с руководством по эксплуатации нажимали кнопку включения и устанавливали требуемое время;

  6. включали установку в режим генерации вспышек.

Методология исследования:

  1. Приготовление суточной культуры стафилококка на агаризованной питательной среде ЖСА,
  2. Приготовление рабочей суспензии, доведя до плотности 3,3 MсF, что соответствует 109 КОЕ/мл. Контроль жизнеспособности культуры.
  3. Проводили контроль жизнеспособности культуры (Руководство по медицинской микробиологии под редакцией А.С. Лабинской, Е.Г. Волиной, Е.П. Ковалевой.-М.:Издательство БИНОМ,2014.-880с.;ил. в 3-х томах,)
  4. Заданный техническим заданием объем полученной суспензии наносили на центр пластиковой стерильной чашки Петри и облучали в течение времени, указанного в техническом задании.
  5. После облучения в пластиковую чашку добавляли 9,9 мл физиологического раствора.  Тщательно встряхивали и проводили ряд серийных разведений. 
  6. Из серийных разведений, установленных ТЗ, проводили высевы на плотную агаризованную питательную среду ЖСА
  7. Инкубировали чашки в термостате при 37˚С в течение 48 часов.
  8. Проводили подсчет колоний

Контрольные чаши и пластины не подвергали облучению. Все остальные действия проводили в соответствии с п.4-7. Все исследования проводили в 3-х последовательностях.

Эффективность установки «Альфа-06» в отношении S.aureus (%) вычисляли по формуле: (среднее количество колоний на контрольных чашках — среднее количество колоний на опытных чашках): среднее количество колоний на контрольных чашках х 100.

Для средств химической дезинфекции при обработке поверхностей помещений и объектов больничной среды принят критерий эффективности режимов применения 99,99% (4lg). Для изучаемого метода критерии эффективности при проведении профилактической и очаговой дезинфекций поверхностей не разработаны, но они не могут быть меньше указанного уровня.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты изучения эффективности импульсного ультрафиолетового излучения, генерируемого установкой «Альфа-06», в отношении клинического штамма МRSA и тестового штамма S.aureus 906, нанесенных на вертикально ориентированные пластиковые тест-поверхности, расположенные на расстоянии 2-х метров от лампы установки при разном времени воздействия, а также при наличии и отсутствии биологической нагрузки, представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1. Эффективность установки «Альфа-06» в отношении клинического штамма МRSA, нанесенного на тест-поверхности из пластика, расположенные вертикально на расстоянии 2 и 4 метра от источника излучения при разном времени воздействия с белковой нагрузкой и без нее. 

Время облучения, минуты

Результат, КОЕ
(среднее значение, N=3)

Контроль, КОЕ
(среднее значение, N=3)

Эффективность

%

lg

Расстояние до лампы 2 метра. Пластик, без биологической нагрузки

Не облучали

3,2*105

-

-

1

37,7

99,98

3,92

2

5,3

99,998

4,77

Расстояние до лампы 2 метра. Пластик, Микробная взвесь+ биологическая нагрузка

Не облучали

1,1*106

-

1

133,3

99,98

3,93

2

79,0

99,99

4,16

4

28,0

99,997

4,61

Расстояние до лампы 4 метра. Пластик, без биологической нагрузки

Не облучали

3,27*105

-

1

733,3

99,78

2,64

2

207,0

99,93

3,19

4

5,0

99,998

4,91

Таблица 2. Эффективность установки «Альфа-06» в отношении тестового штамма S. Aureus 906 без белковой нагрузки, нанесенного на тест-поверхности из пластика, расположенные вертикально на расстоянии 2 метра от источника излучения при 2 минутах воздействия.

Время облучения, мин.

Результат КОЕ

Эффективность

%

lg

расстояние от установки 2м.

2

0,0,0

ср. 0

100%

4,68

Контроль – 4, 878 х104 КОЕ

Контроль жизнеспособности – 2,9х 108 КОЕ/мл

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты выполненных исследований показали, что импульсное ультрафиолетовое излучение сплошного спектра, генерируемое установкой «Альфа-06», обладает выраженным бактерицидным действием.

При облучении пластиковых чашек Петри, контаминированных клиническим штаммом МRSA и размещенных на расстоянии 2 м от установки, в течение 2 минут получена эффективность 99,998%.

Введение биологической нагрузки незначительно снизило эффективность (с 99,998% до 99,992%), при 2-х минутной экспозиции.

Увеличение расстояния от источника излучения до пластиковых чашек с 2-х до 4-х метров привело к падению эффективности при 2-х минутной экспозиции с 99,998% до 99,93 %. Достичь редукции, превышающей 4lg (эффективность 99,998%) удалось при увеличении времени облучения с 2-х до 4-х минут.

ВЫВОДЫ:

  1. Экспериментально доказана высокая эффективность импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-06», генерирующей ультрафиолетовое излучение сплошного спектра, при обеззараживании пластиковых поверхностей, контаминированных клиническим и тестовым штаммами S. Aureus.
  2. Установлено, что эффективность УФ-излучения, генерируемого импульсной установкой «Альфа-06», в отношении клинического штамма МRSA (с биологической нагрузкой и без нее), нанесенного на пластиковые тест-поверхности, расположенные на расстоянии 2 метра от установки, составляет более 99,99% при 2 минутах воздействия.
  3. Увеличение расстояния от источника излучения до тестовых поверхностей в два раза (с 2-х до 4-х метров) потребовало увеличения времени облучения с2-х до 4-х минут для обеспечения эффективности более 99,99%. Увеличение расстояния до обрабатываемой поверхности не приводит к снижению бактерицидной активности импульсного УФ-излучения сплошного спектра.
  4. Полученные в исследованиях уровни эффективности импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-06» соответствуют критериям эффективности, принятым для дезинфицирующих средств, применяемых в режиме дезинфекции поверхностей помещений и объектов больничной среды (99,99%) (Руководство Р 4.2.2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», М. 2011 г.)
  5. Проведенные исследования позволяют рекомендовать передвижные импульсные ультрафиолетовые установки «Альфа-06» к применению в медицинских организациях всех профилей:
    • при проведении в помещениях всех видов профилактической дезинфекции, особенно в помещениях классов чистоты А и Б;
    • при проведении очаговой дезинфекции открытых поверхностей в помещениях, контаминированных бактериями с множественной устойчивостью к антимикробным препаратам и дезинфицирующим средствам;
    • при обеззараживании поверхностей в помещениях в условиях их биологического загрязнения (кровь, моча, мокрота).