Bacillus licheniformis, «Альфа-05»

• Споры бактерий
• Институт медико-биологических проблем РАН, Москва
• 2007 г.

ПРОТОКОЛ
испытаний импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-05»

Цель испытаний: определение вирулицидной и спороцидной (бактериальной и фунгицидной) активности импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-05» производства НПП «Мелитта» (Москва, Россия).

Место и время проведения испытаний: Государственный научный центр Российской Федерации Институт медико-биологических проблем РАН, сентябрь 2007 г. — январь 2008 г.

Методика исследования эффективности обеззараживания поверхностей: испытания установки проводили в помещении объемом 30 м^з. Определяли эффективность обеззараживания поверхностей в отношении спорообразующих бактерий вида Bacillus licheniformis, плесневых грибов вида Aspergillus niger и вирусов (на модели пио- и колифагов).

В качестве тест-объектов использовали вирусы кишечной палочки — колифаги и бактерий вида Pseudomonas aeruginosa — пиофаги.

Коли- и пиофаги содержатся в препарате Пиополифаг. Препарат представляет собой стерильные фильтраты фаголизатов кишечной и синегнойной палочек. Утверждено 14.03 2002 г. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

В качестве индикатора, позволяющего определить жизнеспособность вирусов (коли- и пиофага) на поверхностях материалов после их УФ облучения, использовали бактерии вида E.coli М 1 и Pseudomonas aeruginosa.

Метод заключался в нанесении на поверхность полимерных материалов определенного количества препарата Пиополифаг, содержащего фильтраты вышеуказанных вирусов и УФ-облучении данных образцов. После УФ- облучения поверхность тест-материалов заливали расплавленной и остуженной до 45⁰С питательной средой, содержащей в своем составе один из вышеперечисленных микроорганизмов.

Облучение осуществлялось с расстояния 1 метра от лампы до тест-объекта. Время облучения варьировало от 7 секунд до 10 минут.

О вирулицидной активности УФ облучения импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-05» судили по наличию и количеству зон фаголизиса, образуемых на поверхности и в толще питательной среды, содержащей чувствительный к данному фагу тест-микроорганизм (E.coli или P.aeruginosa).

Методика испытаний на наличие бактерицидной и фунгицидной активности заключалась в следующем. На поверхность пластиковых чашек Петри диаметром 90 мм наносили 0.1 мл суспензии спор плесневого гриба вида A.niger и спор бактерий вида В. licheniformis.

Споры бактерий вида В. licheniformis получали путем выращивания данных микроорганизмов на питательной среде (картофельный агар) в течение 24 часов при t 37⁰С и 5 суток при t 20-24⁰С. Контроль спорообразования проводили при помощи микроскопа. Исходная концентрация тест-микроорганизмов составляла 5х10⁶ КОЕ/мл.

Споры плесневого гриба вида А. niger получали путем выращивания данной культуры на плотной питательной среде (агар Чапека) в течение 14 дней при t 29⁰С. Контроль спорообразования и подсчет спор проводили при помощи микроскопа и камеры Горяева. Исходная концентрация спор составляла от 8х10⁵ до 2х10⁶ КОЕ/мл.

Суспензию микроорганизмов равномерно распределяли по поверхности чашек Петри при помощи шпателя.

Микрокапли суспензии подсушивали при комнатной температуре (20-24⁰С) в течение 30-40 минут.

Часть чашек Петри (n=4) не облучали и использовали в качестве контроля для определения количества колониеобразующих клеток (КОЕ) микроорганизмов.

Другую часть зараженных тест микроорганизмами чашек Петри устанавливали под лампу установки «Альфа-05».

Расстояние от зараженных поверхностей чашек Петри до ламп составляло 100 см. Время облучения импульсной ксеноновой УФ установкой составляло от 2 секунд, до 7 минут.

Непосредственно после облучения чашки Петри заливались 8-10 мл расплавленной и остуженной до 40-45 ⁰С питательной средой (триптазо-соевым агаром для бактерий и агаром Чапека для плесневых грибов).

После того как питательные среды застывали, чашки Петри помещали в термостаты при 37⁰С для бактерий и при 29⁰С для плесневых грибов.

Чашки Петри с культурами бактерий экспонировали в термостате в течение 24-48 часов, а с культурами плесневого гриба A.niger — от 2 до 10 суток.

После истечения указанного времени подсчитывали число жизнеспособных клеток в опыте и контроле и по различию этих показателей судили об эффективности работы УФ ламп.

Результаты исследований вирулицидной активности импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-05» представлены в таблицах 1-4.

Таблица 1. Результаты оценки эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» при низкой концентрации пиофага

Таблица 2. Результаты оценки эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» при высокой концентрации пиофага

Таблица З. Результаты оценки эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» при низкой концентрации колифага

Таблица 4. Результаты оценки эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» при высокой концентрации колифага

Анализ полученных результатов проводился по стандартной методике.

Показана высокая вирулицидная эффективность обеззараживания поверхностей материалов с помощью установки «Альфа-05», как при низкой, так и высокой концентрации вирусов.

Уже за 1 минуту работы установки достигается 100⁰/0 эффективность обеззараживания поверхностей с расстояния 1 метра в широком диапазоне исходной обсемененности тест-объектов.

Результаты исследований спороцидной активности импульсной ультрафиолетовой установки «Альфа-05» представлены в таблицах 5-6.

Таблица 5. Результаты эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» от спор плесневого гриба A.niger

Исследования показали, что уже через 0,5 минуты работы установки количество жизнеспособных спор плесневого гриба A.niger снизилось по сравнению с контролем в 555 раз и составляло 72х10² КОЕ/100см². Эффективность обеззараживания поверхностей составляла 99.82%.

После 18 минут работы установки число жизнеспособных спор снизилось до 3.8х10² КОЕ/100см². Эффективность обеззараживания поверхностей составила 99.99%.

Таблица 6. Результаты эффективности обеззараживания поверхностей импульсной ультрафиолетовой установкой «Альфа-05» от спор бактерий вида В. Licheniformis

Подобные данные получены и в отношении спор бактерий вида В. licheniformis. Так, 99,9% уровень обеззараживания поверхностей полимерных материалов был, достигнут в первые 0,5 минуты работы УФ установки «Альфа-05». После 1,5 минут работы установки содержание жизнеспособных спор снизилось на 4 порядка и составляло 5,0х10² КОЕ/100см² поверхности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Импульсная ультрафиолетовая установка «Альфа-05» показала высокую вирулицидную (100%) и спороцидную (99,9%- 99,99%) эффективность.

Установка обеспечивала за 1 минуту работы с расстояния 1 метр снижение количества зон фаголизиса с 10²-10³ на 100см² поверхности до 0 на 100 см² (100% эффективность).

Эффективность обеззараживания поверхностей от бактериальных спор и спор плесневых грибов с расстояния 1 метр от установки составляла 99,9%. Данная эффективность достигалась для спор бактерий за 0,5 минуты, а для спор грибов — за 18 минут работы установки «Альфа-05».