Mycobacterium terrae, УИКб-01-«Альфа»

  • Бактерии
  • Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом, Москва
  • 2013 г.
Посмотреть документ

ОТЧЕТ
о научно-исследовательской работе по договору
N 001/2013/СШ от 19.04.2013 г. Изучение микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01 «Альфа» на микобактерии туберкулеза
с широкой лекарственной устойчивостью при различной
экспозиции излучения

В соответствии с техническим заданием и календарным планом к договору (ДОГОВОР № 001/2013/СШ от 19 апреля 2013 года)   в Централизованной микробиологической лаборатории (ЦБЛ) Московского научно-практического центра борьбы с туберкулезом ДЗМ (МНПЦ борьбы с туберкулезом) проведены изучение и оценка микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01-«Альфа» на микобактерии туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью при различной экспозиции излучения.

Цель исследования:

Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения установки УИКб-0-«Альфа» на контрольные тест-штаммы Mycobacterium terrae, Mycobacterium HuRv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (Приложение 2).

При выполнении указанного исследования ООО «Научно- Производственное Предприятие «МЕЛИТТА» предоставило ЦБЛ МНПЦ борьбы с туберкулезом установку УИКб-01 «Альфа» и основные параметры проведения эксперимента:

  • Ламинарный шкаф II степени биологической безопасности;

  • Импульсная ксеноновая лампа, которая устанавливается в ламинарном шкафу II класса биологической безопасности на расстоянии 40 см от поверхности чашки Петри с облучаемой микобактериальной суспензией;

  • При проведении эксперимента (сеанса облучения) в поле воздействия импульсной ксеноновой лампы должны располагаться 4 облучаемые чашки с суспензией;

  • Необходимые экспозиции облучения должны составлять 20 сек., 1мин. и 3 минуты по таймеру прибора.

Во время проведения эксперимента эти условия выполнялись сотрудниками ЦБЛ и контролировались командированным в ЦБЛ сотрудником ООО HПП «МЕЛИТТА».

В процессе выполнения исследования проведено:

  1. Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения на контрольные тест-штаммы: Mycobacterium terrae (коллекция МНИИ эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора), Мycobacterium Н37Rv, 10 (десять) клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (устойчивые к изониазиду, рифампицину, аминогликозидам, этамбутолу, пиразинамиду, капреомицину, этионамиду и фторхинолонам) на 36 чашках Петри с питательной средой Левенштейна- Иенсена, засеянных стандартной суспензией указанных штаммов в трех временных экспозициях.

  2. Повторное определение лекарственной чувствительности штаммов МБ в случае появления их роста после сеансов облучения.

Аранжировка опыта и ее обоснование

При аранжировки опытов по испытанию установки УИКб-01-«Альфа» бактерицидного действия на микобактерии туберкулеза выбрана микробная нагрузка 250 КОЕ на 1 куб.м.

  1. В качестве тест - объектов использованы Mycobacterium terrae, Mycobacterium H37Rv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью, выделенных от больных туберкулезом.
    Лекарственная чувствительность всех тест-штаммов определена в соответствии с рекомендациями приказа Минздрава РФ № 109 от 21.03.2003 и рекомендациями BO3 от 2008 года.
    Стандартизацию дозы микобактерий (МБ) производили по стандарту № 5 ГИСК 500 000 000 микробных тел в 1 мл стерильного физиологического раствора с последующими серийными разведениями до получения требуемой микробной нагрузки (250 КОЕ).
    Полученную микробную суспензию каждого испытуемого штамма МБ делили на 2 порции, одну из которых (контроль исследования) засевали без облучения. Вторую порцию микробной суспензии облучали при различных экспозициях (20 сек., 1 мин., 3 мин.) и засевали на жидкую и плотную среды. По завершении посевов облученных суспензий опытные и контрольные пробирки и чашки Петри помещали в термальную камеру и в автоматизированный прибор BACTEC MGIT 960 для инкубации.
    Учет результатов производили микроскопически и макроскопически по истечению максимальных сроков культивирования и датам регистрации прибора BACTEC MGIT 960.

  2. Изучена лекарственная чувствительность выделенных культур клинических штаммов (№№ 8, 11) ко всем вышеуказанным лекарственным препаратам.
    Повторно определена лекарственная чувствительных двух штаммов МБТ (№№ 8,11), выросших после облучения при экспозициях 20 сек и 1 минута.
    Установленная ранее лекарственная устойчивость указанных штаммов (№№ 8, 11) после облучения не изменилась (Приложение 2).
    Результаты опытов представлены в таблице 1. (См. Приложение 1)

Заключение:

В условиях проведенной выше аранжировки опыта при использованных режимах облучения достигнут полный бактерицидный эффект в отношении Mycobacterium terrae, Mycobacterium Н37Rv и восьми из десяти клинических штаммов с широкой лекарственной устойчивостью.

Получен рост двух клинических штаммов (№№ 8, 11) на жидкой и плотной питательных средах после 20 сек. и 1 мин. воздействия ксеноновой лампы установки УИКб-01-«Альфа» на суспензию этих штаммов и отсутствие роста МБТ при экспозиции 3 минуты.

Результаты определения бактерицидной активности установки УИКб-01-«Альфа» в отношении Mycobacterium terrae, Mycobacterium H37Rv и десяти клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis

Таблица 1

Условные номера исследованных культур МБ

Рост МБ после облучения

Опыт

Контроль

20 сек.

1 мин.

3 мин.

20 сек.

1 мин.

3 мин.

1. Mycobacterium terrae

-

-

-

+++

+++

+++

2. Mycobacterium H37Rv

-

-

-

+++

+++

+++

3.

-

-

-

+++

+++

+++

4.

-

-

-

+++

+++

+++

5.

-

-

-

+++

+++

+++

6.

-

-

-

+++

+++

+++

7.

-

-

-

+++

+++

+++

8.

+++*

+++

-

+++

+++

+++

9.

-

-

-

+++

+++

+++

10.

-

-

-

+++

+++

+++

11.

++*

++

-

+++

+++

+++

12.

-

-

-

+++

+++

+++

Примечание: (—) - отсутствие роста МБ;

(++, +++) — наличие роста МБ:

* ++ - 21 — 100 КОЕ (колониеобразующих единиц) — «умеренное» бактериовыделение;

**+++ — > 100 КОЕ            - « -     « -        «          — «обильное» бактериовыделение; 

Основание: ПРИКАЗ МЗ РФ от 21 марта 2003 г. № 109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».

Результаты определения резистентности исследованных культур MB к противотуберкулезным препаратам

Таблица 2

Результаты определения резистентности исследованных культур MB к противотуберкулезным препаратам

Примечание:

  • S — стрептомицин
  • Кm — канамицин
  • Ofx — офлоксацин
  • Am — амикацин
  • I — изониазид
  • Et — этионамид
  • Lfx — левофлоксацин
  • Cm — капреомицин
  • R — рифампицин
  • Cs — циклосерин
  • Cfx — ципрофлоксацин
  • Pza — пиразинамид
  • Е — этамбутол
  • Pas — ПАСК
  • Mox — моксифлоксацин
  • ATCC — American Type Culture Collection