- Бактерии
- Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом, Москва
- 2013 г.
ОТЧЕТ
о научно-исследовательской работе по договору
N 001/2013/СШ от 19.04.2013 г. Изучение микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01 «Альфа» на микобактерии туберкулеза
с широкой лекарственной устойчивостью при различной
экспозиции излучения
В соответствии с техническим заданием и календарным планом к договору (ДОГОВОР № 001/2013/СШ от 19 апреля 2013 года) в Централизованной микробиологической лаборатории (ЦБЛ) Московского научно-практического центра борьбы с туберкулезом ДЗМ (МНПЦ борьбы с туберкулезом) проведены изучение и оценка микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01-«Альфа» на микобактерии туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью при различной экспозиции излучения.
Цель исследования:
Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения установки УИКб-0-«Альфа» на контрольные тест-штаммы Mycobacterium terrae, Mycobacterium HuRv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (Приложение 2).
При выполнении указанного исследования ООО «Научно- Производственное Предприятие «МЕЛИТТА» предоставило ЦБЛ МНПЦ борьбы с туберкулезом установку УИКб-01 «Альфа» и основные параметры проведения эксперимента:
-
Ламинарный шкаф II степени биологической безопасности;
-
Импульсная ксеноновая лампа, которая устанавливается в ламинарном шкафу II класса биологической безопасности на расстоянии 40 см от поверхности чашки Петри с облучаемой микобактериальной суспензией;
-
При проведении эксперимента (сеанса облучения) в поле воздействия импульсной ксеноновой лампы должны располагаться 4 облучаемые чашки с суспензией;
-
Необходимые экспозиции облучения должны составлять 20 сек., 1мин. и 3 минуты по таймеру прибора.
Во время проведения эксперимента эти условия выполнялись сотрудниками ЦБЛ и контролировались командированным в ЦБЛ сотрудником ООО HПП «МЕЛИТТА».
В процессе выполнения исследования проведено:
-
Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения на контрольные тест-штаммы: Mycobacterium terrae (коллекция МНИИ эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора), Мycobacterium Н37Rv, 10 (десять) клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (устойчивые к изониазиду, рифампицину, аминогликозидам, этамбутолу, пиразинамиду, капреомицину, этионамиду и фторхинолонам) на 36 чашках Петри с питательной средой Левенштейна- Иенсена, засеянных стандартной суспензией указанных штаммов в трех временных экспозициях.
-
Повторное определение лекарственной чувствительности штаммов МБ в случае появления их роста после сеансов облучения.
Аранжировка опыта и ее обоснование
При аранжировки опытов по испытанию установки УИКб-01-«Альфа» бактерицидного действия на микобактерии туберкулеза выбрана микробная нагрузка 250 КОЕ на 1 куб.м.
-
В качестве тест - объектов использованы Mycobacterium terrae, Mycobacterium H37Rv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью, выделенных от больных туберкулезом.
Лекарственная чувствительность всех тест-штаммов определена в соответствии с рекомендациями приказа Минздрава РФ № 109 от 21.03.2003 и рекомендациями BO3 от 2008 года.
Стандартизацию дозы микобактерий (МБ) производили по стандарту № 5 ГИСК 500 000 000 микробных тел в 1 мл стерильного физиологического раствора с последующими серийными разведениями до получения требуемой микробной нагрузки (250 КОЕ).
Полученную микробную суспензию каждого испытуемого штамма МБ делили на 2 порции, одну из которых (контроль исследования) засевали без облучения. Вторую порцию микробной суспензии облучали при различных экспозициях (20 сек., 1 мин., 3 мин.) и засевали на жидкую и плотную среды. По завершении посевов облученных суспензий опытные и контрольные пробирки и чашки Петри помещали в термальную камеру и в автоматизированный прибор BACTEC MGIT 960 для инкубации.
Учет результатов производили микроскопически и макроскопически по истечению максимальных сроков культивирования и датам регистрации прибора BACTEC MGIT 960. -
Изучена лекарственная чувствительность выделенных культур клинических штаммов (№№ 8, 11) ко всем вышеуказанным лекарственным препаратам.
Повторно определена лекарственная чувствительных двух штаммов МБТ (№№ 8,11), выросших после облучения при экспозициях 20 сек и 1 минута.
Установленная ранее лекарственная устойчивость указанных штаммов (№№ 8, 11) после облучения не изменилась (Приложение 2).
Результаты опытов представлены в таблице 1. (См. Приложение 1)
Заключение:
В условиях проведенной выше аранжировки опыта при использованных режимах облучения достигнут полный бактерицидный эффект в отношении Mycobacterium terrae, Mycobacterium Н37Rv и восьми из десяти клинических штаммов с широкой лекарственной устойчивостью.
Получен рост двух клинических штаммов (№№ 8, 11) на жидкой и плотной питательных средах после 20 сек. и 1 мин. воздействия ксеноновой лампы установки УИКб-01-«Альфа» на суспензию этих штаммов и отсутствие роста МБТ при экспозиции 3 минуты.
Результаты определения бактерицидной активности установки УИКб-01-«Альфа» в отношении Mycobacterium terrae, Mycobacterium H37Rv и десяти клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis
Таблица 1
Условные номера исследованных культур МБ |
Рост МБ после облучения |
|||||
Опыт |
Контроль |
|||||
20 сек. |
1 мин. |
3 мин. |
20 сек. |
1 мин. |
3 мин. |
|
1. Mycobacterium terrae |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
2. Mycobacterium H37Rv |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
3. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
4. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
5. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
6. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
7. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
8. |
+++* |
+++ |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
9. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
10. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
11. |
++* |
++ |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
12. |
- |
- |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
Примечание: (—) - отсутствие роста МБ;
(++, +++) — наличие роста МБ:
* ++ - 21 — 100 КОЕ (колониеобразующих единиц) — «умеренное» бактериовыделение;
**+++ — > 100 КОЕ - « - « - « — «обильное» бактериовыделение;
Основание: ПРИКАЗ МЗ РФ от 21 марта 2003 г. № 109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».
Результаты определения резистентности исследованных культур MB к противотуберкулезным препаратам
Таблица 2
Примечание:
- S — стрептомицин
- Кm — канамицин
- Ofx — офлоксацин
- Am — амикацин
- I — изониазид
- Et — этионамид
- Lfx — левофлоксацин
- Cm — капреомицин
- R — рифампицин
- Cs — циклосерин
- Cfx — ципрофлоксацин
- Pza — пиразинамид
- Е — этамбутол
- Pas — ПАСК
- Mox — моксифлоксацин
- ATCC — American Type Culture Collection