Mycobacterium tuberculosis, штамм H37Rv, ШЛУ-штаммы (ПТП 1 и 2 ряда), УИКб-01-«Альфа»

• Бактерии
• Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом, Москва
• 2013 г.

ОТЧЕТ
о научно-исследовательской работе по договору №001/2013/СШ от 19.04.2013 г. «Изучение микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01 «Альфа» на микобактерии туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью при различной экспозиции излучения»

В соответствии с техническим заданием и календарным планом к договору (ДОГОВОР № 001/2013/СШ от 19 апреля 2013 года) в Централизованной микробиологической лаборатории (ЦБЛ) Московского научно-практического центра борьбы с туберкулезом ДЗМ (МНПЦ борьбы с туберкулезом) проведены изучение и оценка микобактерицидной активности ультрафиолетового излучения импульсной ксеноновой лампы установки УИКб-01 «Альфа» на микобактерии туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью при различной экспозиции излучения.

Цель исследования

Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения установки УИКб-01 «Альфа» на контрольные тест-штаммы Mycobacterium terrae, Mycobacterium HuRv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (Приложение 2).

При выполнении указанного исследования ООО «Научно- Производственное Предприятие «МЕЛИТТА» предоставило ЦБЛ МНПЦ борьбы с туберкулезом установку УИКб-01 «Альфа» и основные параметры проведения эксперимента:

• Ламинарный шкаф II степени биологической безопасности;
• Импульсная ксеноновая лампа, которая устанавливается в ламинарном шкафу II класса биологической безопасности на расстоянии 40 см от поверхности чашки Петри с облучаемой микобактериальной суспензией;
• При проведении эксперимента (сеанса облучения) в поле воздействия импульсной ксеноновой лампы должны располагаться 4 облучаемые чашки с суспензией;
• Необходимые экспозиции облучения должны составлять 20 сек., 1 мин. и 3 минуты по таймеру прибора.

Во время проведения эксперимента эти условия выполнялись сотрудниками ЦБЛ и контролировались командированным в ЦБЛ сотрудником ООО НПП «МЕЛИТТА».

В процессе выполнения исследования проведено:

• Определение эффективной экспозиции бактерицидного воздействия импульсного ультрафиолетового излучения на контрольные тест-штаммы: Mycobacterium terrae (коллекция МНИИ эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора), ïlycobacterium Rv, 10 (десять) клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью (устойчивые к изониазиду, рифампицину, аминогликозидам, этамбутолу, пиразинамиду, капреомицину, этионамиду и фторхинолонам) на 36 чашках Петри с питательной средой Левенштейна- Иенсена, засеянных стандартной суспензией указанных штаммов в трех временных экспозициях.

• Повторное определение лекарственной чувствительности штаммов МБ в случае появления их роста после сеансов облучения.

Аранжировка опыта и ее обоснование

При аранжировки опытов по испытанию установки УИКб-01 «Альфа» бактерицидного действия на микобактерии туберкулеза выбрана микробная нагрузка 250 КОЕ на 1 куб.м.

• В качестве тест-объектов использованы Mycobacterium terrae, Mycobacterium H₃₇Rv и десять клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, обладающих широкой лекарственной устойчивостью, выделенных от больных туберкулезом.

Лекарственная чувствительность всех тест-штаммов определена в соответствии с рекомендациями приказа Минздрава РФ № 109 от 21.03.2003 и рекомендациями BO3 от 2008 года. (Необходима таблица). Стандартизацию дозы микобактерий (МБ) производили по стандарту №5 ГИСК 500 000 000 микробных тел в 1 мл стерильного физиологического раствора с последующими серийными разведениями до получения требуемой микробной нагрузки (250 КОЕ).

Полученную микробную суспензию каждого испытуемого штамма МБ делили на 2 порции, одну из которых (контроль исследования) засевали без облучения. Вторую порцию микробной суспензии облучали при различных экспозициях (20 сек., 1 мин., 3 мин.) и засевали на жидкую и плотную среды. По завершении посевов облученных суспензий опытные и контрольные пробирки и чашки Петри помещали в термальную камеру и в автоматизированный прибор BACTEC MGIT 960 для инкубации.

Счет результатов производили микроскопически и макроскопически по истечению максимальных сроков культивирования и датам регистрации прибора BACTEC MGIT 960.

• Изучена лекарственная чувствительность выделенных культур клинических штаммов (№№ 8, 11) ко всем вышеуказанным лекарственным препаратам.

Повторно определена лекарственная чувствительных двух штаммов МБТ (№№ 8,11), выросших после облучения при экспозициях 20 сек и 1 минута. Установленная ранее лекарственная устойчивость указанных штаммов (№№ 8, 11) после облучения не изменилась (Приложение 2).

Результаты опытов представлены в таблице 1. (См. Приложение 1)

Заключение

В условиях проведенной выше аранжировки опыта при использованных режимах облучения достигнут полный бактерицидный эффект в отношении Mycobacterium terrae, Mycobacterium Н₃₇Rv и восьми из десяти клинических штаммов с широкой лекарственной устойчивостью.

Получен рост двух клинических штаммов (№№ 8, 11) на жидкой и плотной питательных средах после 20 сек. и 1 мин. воздействия ксеноновой лампы установки УИКб-01 «Альфа» на суспензию этих штаммов и отсутствие роста МБТ при экспозиции 3 минуты.